Der bakterielle Endotoxintest (BET) wird in den meisten modernen Labors unter kontrollierten Bedingungen durchgeführt, um Störungen zu vermeiden.
Geeignetaseptische Technikist wichtig bei der Vorbereitung und Verdünnung von Standards und beim Umgang mit Proben.KleidungPraxis außerhalb der normalen Labor-persönlichen Schutzausrüstung (PSA)-Anforderungen sind kein Problem, es sei denn, das zu testende Produkt erfordert aufgrund von Toxizität oder Infektiosität besondere Sicherheitsüberlegungen durch den Analysten.Handschuhesollte frei von Talkum sein, da das Talkum erhebliche Mengen an Endotoxinen enthalten kann.Plattenlesegeräte, Wasserbäder und TrockenwärmeblöckeDas für die Probeninkubation verwendete Gerät sollte auf einem Labortisch stehen und nicht in der Nähe von Heizungs-, Lüftungs- und Klimaanlagenkanälen (HLK), starken Vibrationen und Laborverkehr stehen, die die Testergebnisse beeinträchtigen könnten.Probenhaltezeiten und -bedingungenUm sicherzustellen, dass in der vorgegebenen Zeit genaue Testergebnisse generiert werden können, sollten diese ermittelt und ggf. anschließend dokumentiert werden.
Wenn das Labor beispielsweise eine Wasserprobe für Injektionszwecke (WFI) oder eine In-Prozess-Probe erhält, muss diese dann gekühlt werden oder kann sie bei Raumtemperatur aufbewahrt werden und wie lange?Es wird empfohlen, vor dem Testen die primären Probenbehälter ausreichend zu mischen, bevor die Testaliquote(n) für den direkten Test oder die anschließende Verdünnung entnommen werden.
Der bakterielle Endotoxin-Test von Bioendo umfasst die ExperimenteGel-Clot-MethodeEndotoxintest undQuantitativer EndotoxintestDer Endotoxin-Test mit der Gel-Gerinnsel-Methode ist ein qualitativer Endotoxin-Nachweis. Für dieses Experiment sind Verbrauchsmaterialien zur Depyrogenisierung erforderlich, z. B. endotoxinfreie Reaktionsröhrchen, Verdünnungsröhrchen und pyrogenfreie Spitzen.Für den quantitativen Nachweis von Endotoxinen gibt es einen kinetischen chromogenen Endotoxintest und einen kinetischen turbidimetrischen Endotoxintest. Für dieses Experiment müssen Verbrauchsmaterialien verwendet werden, die den Endotoxin-Höchstwert von weniger als 30 % erreichen müssen0,005EU/ml(0,001 EU/ml), wie endotoxinfreie Röhrchen, pyrogenfreie Spitzen und pyrogenfreie Mikrotiterplatten, sogar pyrogenfreie Reservoirs.Übrigens: Bei der Probenaufbereitung muss der Behälter eine endotoxinfreie Probenflasche sein.
Beim Endotoxintest können Störungen aus verschiedenen Quellen entstehen, beispielsweise durch Komponenten der Probenmatrix, Testreagenzien oder Geräte.
Um Versuchsstörungen zu vermeiden, können folgende Maßnahmen ergriffen werden:
1. Probenvorbereitung: Die richtige Probenvorbereitung ist für genaue Endotoxintests unerlässlich.
Die Probenmatrix sollte gründlich getestet und optimiert werden, um die Kompatibilität mit dem Endotoxin-Assay sicherzustellen.
Insbesondere störende Substanzen wie Lipide und Proteine sollten durch geeignete Techniken wie Filtration oder Zentrifugation entfernt oder minimiert werden.
2. Positive und negative Kontrollen: Es ist wichtig, positive und negative Kontrollen in den Test einzubeziehen, um Interferenzen zu überwachen.
Positivkontrollen bestätigen die Funktionalität des Tests, während Negativkontrollen jegliche Kontamination oder Interferenz durch die Testkomponenten erkennen.
3. Qualitätskontrolle: Eine Qualitätskontrolle sollte an allen im Test verwendeten Reagenzien, Geräten und Wasser durchgeführt werden.
Dadurch wird sichergestellt, dass die Reagenzien frei von Endotoxinkontaminationen sind und ordnungsgemäß funktionieren.
4. Standardisierung: Der Assay sollte standardisiert werden, um sicherzustellen, dass alle Ergebnisse vergleichbar und reproduzierbar sind.
Dies beinhaltet die Verwendung einer Standardkurve zur Kalibrierung des Assays und den Einsatz standardisierter Techniken zur Probenvorbereitung, Inkubation und Detektion.
5. Validierung: Der Assay sollte validiert werden, um sicherzustellen, dass er spezifisch, empfindlich und zuverlässig ist.
Dabei wird eine Reihe von Proben getestet, darunter auch solche, von denen bekannt ist, dass sie Endotoxin enthalten, um die Genauigkeit und Präzision des Tests zu bestimmen.
Durch Befolgen dieser Maßnahmen können Störungen minimiert und genaue Endotoxintests durchgeführt werden.
Zeitpunkt der Veröffentlichung: 01.12.2022
